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Avaliação da integridade das células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo humano após o bioprocesso de criopreservação

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As celulas-tronco de origem adulta surgem como promessa terapeutica na medicina regenerativa podendo ser encontradas em diversos tecidos como o adiposo. Com as perspectivas da criacao de um banco de celula-tronco para pesquisa e posterior uso terapeutico, o estudo da criopreservacao dessas celulas urge, a fim de garantir que essas celulas apos o descongelamento permanecam viaveis e funcionais. Objetivos: Comparar as celulas-tronco do tecido adiposo antes da criopreservacao e apos o seu descongelamento quanto a: a) indice de proliferacao e capacidade de formar colonias b) expressao das moleculas de superficies em especial a integrina ƒ¿4; c) capacidade de diferenciacao d) viabilidade e integridade celular. Metodos: Celulas-tronco adultas foram obtidas do tecido adiposo de 10 mulheres e 2 homens, saudaveis pela tecnica de lipoaspiracao, realizada por cirurgioes plasticos e apos o consentimento informado. O isolamento das celulas foi realizado atraves de digestao enzimatica com colagenase tipo I posterior cultivo em DMEM/F12 suplementado com 10% de SFB e 100U/mL de Penicilina/100ƒÊg/mL de Estreptomicina. Foi calculado o indice de proliferacao celular da primeira a terceira passagem para cada amostra. Realizadas analises de unidade formadora de colonia na segunda passagem, as celulas foram submetidas a diferenciacao adipogenica e osteogenica com auxilio de meios indutores. A Imunofenotipagem atraves de citometria de fluxo (FACS Calibur; Becton Dickinson, USA), utilizando-se marcadores: CD34, CD45, CD49d, CD73, CD90, CD105, anexina V e 7-AAD, seguidas do processo de criopreservacao, precedido de congelamento programavel (Nicool LM10). Vinte dias apos, as celulas foram descongeladas e os testes repetidos. Resultados: Rendimento celular: 9,09 } 4,55 X 106 celulas/mL isoladas. Indice de proliferacao antes da criopreservacao: Passagens 1= 0,24; 2= 21,33; 3= 13,03 (p=0,001), respectivamente; passagem 3=17,43 }4,11 apos descongelamento (p=0,07). Unidade formadora de colonia antes da criopreservacao: 28,08 % } 7,06%, apos o descongelamento 21,51% } 6,61% (p=0,001).Todas as amostras induzidas tiveram diferenciacao adipogenica e osteogenica, antes da criopreservacao e apos o descongelamento. A analise imunofenotipica demonstrou as seguintes expressoes antes da criopreservacao: CD34- (98,88% } 1,08%), CD45- (99,79% } 0,22%), CD49d+ (88,67% } 6,55), CD90+ (99,55 } 0,07%), CD73+ (99,57% } 0,43%) e CD105+ (99,4% } ,64%); Apos o descongelamento: CD34- (99,26% } 0,61%, p= 0,11), CD45- (99,8% } 0,14%, p= 0,79), CD49d+ (77,8% } 14,45%, p= 0,01), CD73+ (99,5% } 0,43%, p= 0,53), CD90+(99,45 } 0,7%, p= 0,62), CD105+ (98,26% } 2,07%, p= 0,05). Viabilidade celular (7-AAD-) e apoptose (Anexina V-) antes da criopreservacao: 91,39% } 5,85%, 91,34% } 4,54%; apos descongelamento das celulas: 76,31% } 13,33% (p= 0,001), 74,99% } 14,19% (p= 0,003), respectivamente. Conclusao: As celulas-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo mantem suas caracteristicas imunofenotipicas, viabilidade, capacidades de proliferacao e de diferenciacao apos o descongelamento das celulas criopreservadas, a excecao da integrina ƒ¿4 (CD 49d), uma molecula de adesao que participa da integracao da celula no tecido hospedeiro.

Link: http://dspace.c3sl.ufpr.br/dspace/handle/1884/26521?show=full

Fonte: Irioda, Ana Carolina